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普瑞邦芝麻黃曲霉毒素總量檢測(cè)的解決方案
【進(jìn)口芝麻檢出黃曲霉毒素超標(biāo)】新年初，黃島檢驗(yàn)檢疫局發(fā)布近期進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫情況，進(jìn)口芝麻中檢出了黃曲霉毒素超標(biāo)等情況受到關(guān)注。芝麻是我國(guó)主要油料作物之一，且芝麻營(yíng)養(yǎng)豐富，成為多種食品的主要材料。中國(guó)即成為芝麻生產(chǎn)與消費(fèi)大國(guó)。目前我國(guó)年食用和加工芝麻約需要110萬噸，但芝麻年生產(chǎn)量只有65萬-70萬噸，產(chǎn)不足需導(dǎo)致2013年前9個(gè)月我國(guó)芝麻進(jìn)口量大增。海關(guān)、出入境檢驗(yàn)檢疫等部門對(duì)芝麻檢測(cè)量逐漸增大。
然而，芝麻也是容易感染黃曲霉的農(nóng)作物之一，黃曲霉毒素對(duì)芝麻產(chǎn)品具有較高的親和性。黃曲霉毒素具有致癌性和毒性，黃曲霉菌的侵染和產(chǎn)生不僅發(fā)生在芝麻產(chǎn)品的種植、成熟、收獲期中，而且在收獲的晾曬、存儲(chǔ)及其以后的加工、儲(chǔ)運(yùn)等加工過程中也會(huì)產(chǎn)生。我國(guó)芝麻種植面積大，地域廣泛，且目前我國(guó)農(nóng)村芝麻種植地區(qū)尚未實(shí)施備案管理或認(rèn)證資質(zhì)，國(guó)家相關(guān)部門無法進(jìn)行全部控制。此外，我國(guó)從國(guó)外進(jìn)口的芝麻也有質(zhì)量問題，近期，檢驗(yàn)檢疫局連續(xù)檢出進(jìn)口芝麻不合格，黃曲霉毒素超標(biāo)情況受到關(guān)注。
Pribolab(普瑞邦)作為專業(yè)從事霉菌毒素檢測(cè)技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商之一，整合了原北京泰樂祺檢測(cè)應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室，專注于霉菌毒素檢測(cè)產(chǎn)品和技術(shù)解決方案的服務(wù),以期快速提出解決方案。針對(duì)芝麻中黃曲霉毒素總量的檢測(cè)，以穩(wěn)定、準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)單為導(dǎo)向，建立了一套完整的解決方案。
參考標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)國(guó)標(biāo)《GB/T18979-2003》食品中黃曲霉毒素的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。
（一）免疫親和柱-高效液相色譜法：GB/T18979-2003國(guó)標(biāo)方法
1. 所需設(shè)備和耗材
高效液相色譜儀
色譜柱：真菌毒素專用色譜柱（PRC-18，Pribolab）。
免疫親和柱：PriboFast®黃曲霉毒素總量免疫親和柱(3ml，25支/盒，IAC-011-3，Pribolab，快速過柱型)。
高速均質(zhì)器：達(dá)到22000rpm 以上(EQ-WR-1L，Pribolab)。
玻璃纖維濾紙：PriboFast®玻璃纖維濾紙（GMF-110，Pribolab）
PriboFast®八位泵流操作架（Pribolab，用于控制免疫親和柱過柱流速）
標(biāo)準(zhǔn)品：黃曲霉毒素混標(biāo)（2µg/ml 黃曲霉毒素 B1, G1 和0.5µg/ml黃曲霉毒素B2, G2 (4/1/4/1)，STD#1081，Pribolab）
2. 樣品前處理:普瑞邦針對(duì)糧谷、油脂、油料等提供不同的處理方案(詳細(xì)方案請(qǐng)聯(lián)系普瑞邦，普瑞邦開發(fā)了針對(duì)不同產(chǎn)品提供優(yōu)化的處理方案)
3. 免疫親和柱凈化:
富集:提取液以2-3mL/min流速通過免疫親和柱，直至2-3mL空氣通過柱體；
洗滌: 10mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，以10mL水洗柱子2次，并使2-3mL空氣通過柱體。
洗脫：加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫,孵育30秒以上,以流速為1-2mL/min過柱，收集全部洗脫液供檢測(cè)用。
4. 高效液相色譜分析
（二）酶聯(lián)免疫法
1. 方法原理
采用直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法，在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素特異抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的抗原與預(yù)包被在板孔上的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣品吸光值與其所含黃曲霉毒素總量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣品中黃曲霉毒素總量的含量。
2. 試劑和材料：酶聯(lián)免疫試劑盒（PriboFastR黃曲霉毒素總量試劑盒EKT-011，Pribolab）
3. 樣本前處理：芝麻及其制品：粉碎、溶解、離心取上清液待測(cè)。
4. 檢測(cè)步驟
4.1 免疫反應(yīng)30min；洗板5次；顯色反應(yīng)30min；終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀讀OD值。
5. 分析結(jié)果的表述
用酶標(biāo)儀判讀結(jié)果。
（三）免疫金標(biāo)快速檢測(cè)法
1. 方法原理
黃曲霉毒素總量快速檢測(cè)條應(yīng)用了競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理，樣本中的黃曲霉毒素總量在酶標(biāo)孔中與膠體金標(biāo)記的特異性抗黃曲霉毒素單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測(cè)線上AF－BSA偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本中黃曲霉毒素總含量大于0.5 ug/L，檢測(cè)線不顯顏色，結(jié)果為陽性；反之，檢測(cè)線顯紅色，結(jié)果為陰性。
2. 試劑和材料
膠體金檢測(cè)試紙：PriboStripTM黃曲霉毒素總量免疫金標(biāo)快速檢測(cè)條（PR-011，Pribolab）
3. 分析步驟：芝麻及其制品溶解后取上清液檢測(cè)。吸取樣品滴加到加樣孔中，8-15分鐘讀取結(jié)果。在C線顯色的情況下：T 線顯色比C線深或一樣深是陰性。T 線顯色比C線淺，或無顯色是陽性結(jié)果。
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