你想知道免疫親和柱使用時有哪些技巧和要求嗎

發布時間： 2022-07-18　　點擊次數： 713次

　　免疫親和柱基于抗原抗體反應，特異性抗體連接在柱體內，選擇性吸附樣品中的待檢物，雜質不被吸附，流出柱外，柱上結合的目標物再被特定的洗脫液洗下來，可以用于液相色譜分析或者ELISA含量測定，是一種高效的前處理柱。可選擇性吸附樣品液中的毒素，從而對樣品起到非常針對性的純化作用，經過柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析。它與HPLC配合使用可達到快速測定的目的，以改善信噪比，提高檢測方法的準確度。

　　免疫親和柱使用技巧：

　　1、上柱的樣品溶液應該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高；

　　2、若樣品為復雜樣品，例如高蛋白、高油脂、酸性樣品，可以將提取液分兩次提取樣品，可以提高提取效果；

　　3、樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；

　　4、抗原抗體發生反應的最佳溫度是在25℃左右，實驗需要的環境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會對回收率有一定的影響。在使用前需要恢復至室溫再進行實驗；

　　5、不要在無水狀態下，瓊脂容易干燥縮，影響質量；

　　6、儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因為緩沖液凍結，會嚴重影響親和柱內的物理結構，對質量影響很大；

　　7、洗脫一般選擇試劑甲醇，為增強洗脫效果可加大甲醇體積。

　　免疫親和柱的選購要求：

　　柱容量抗體：抗體的性質決定了凈化效果，抗體交叉反應多，凈化的物質相對也多。廠家生產親和柱會從成本角度考慮，那么就會出現不同的柱容量，親和柱上連接的抗體越多，柱容量也相應增加，對客戶來說高柱容量對于高污染樣品減少了凈化次數，降低了成本。

　　重要的指標：添加回收率是親和柱的重要回收指標，再樣品提取方法適當的條件下，添加回收是檢測親和柱性能的重要參考指標，請注意，空白樣品的污染值應遠遠小于添加值，這樣會減少誤差。一般添加回收率應在80-110%之間為合格的親和柱產品。

　　柱的吸附量：由于小分子在溶液中會吸附到凝膠上，在檢查了添加回收率之后還應柱的吸附量，一般我們在洗脫步驟會給客戶提供可靠的說明。